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AdvancedBiochimica et Biophysica Acta (BBA) - EnzymologyVolume 438, Issue 1, 7 June 1976, Pages 239-249Etude du complexe plasmine-α2-macroglobuline de porcStudy of the complex between porcine plasmin and α2-macroglobulinAuthor links open overlay panelYvetteJacquot-ArmandSylvanieGuinandShow more

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Citehttps://doi.org/10.1016/0005-2744(76)90240-0Get rights and contentAbstract

Porcine plasmin (EC 3.4.21.7) is obtained from plasminogen activated by human urokinase. This enzyme can bind, in an equimolecular ratio, to an α2-macroglobulin isolated from porcine serum.

The number of active sites of plasmin has been determined through a burst titration of nitroaniline during the presteady-state hydrolysis of an amide substrate (N-α-carbobenzoxy-l-arginine-p-nitroanilide). The kinetic constants relative to a very sensitive ester substrate (N-α-carbobenzoxy-l-lysine nitrophenylester) hydrolysis have been measured.

The binding of plasmin to α2-macroglobulin results in a complete inhibition of proteolytic activity, a reduction of active sites number and a decrease of esterolytic activity towards this substrate. In the complex, the residual activity (about 60%) is protected from protein inhibitors.

Absorbance difference spectra show that 1 mol of α2-macroglobulin binds 1 mol of plasmin and 2 mol of trypsin. When plasmin is first bound to α2macroglobulin, only 1 mol of trypsin can gain access to the second site without removing the plasmin, showing that a steric hindrance is implicated in the inhibition performed by α2-macroglobulin binding.

La plasmine de porc, comme un certain nombre d enzymes à sérine, a la capacité de se lier à l α2-macroglobuline. La formation d un complexe stable met en jeu 1 mol de plasmine pour 1 mol d α2-macroglobuline.

Une étude préalable de la plasmine a permis de mettre au point une technique de mesure de l activité en utilisant comme substrat le N-α-carbobenzoxy-l-arginine-p-nitroanilide (Z-Arg-nitroanilide); la réaction de désacylation étant limitante, on titre les sites actifs de la plasmine par le “jet” de nitroaniline produit. La mesure des constantes cinétiques d hydrolyse du N-α-carbobenzoxy-l-lysine nitrophénylester (Z-Lys-OPhNO2) a montré que cet ester est un substrat très sensible à l action de la plasmine, particulièrement lorsqu il est sous forme nitrée en ortho.

Lorsque la plasmine est liée à l α2-macroglobuline, on observe par rapport à l enzyme libre: (a) une disparition quasi totale de l activité protéolytique (azocaséine), (b) une réduction du taux des sites actifs mesuré à l état préstationnaire (Z-arg-nitroanilide), (c) une diminution d environ 40% des constantes cinétiques mesurées à l état stationnaire (Z-Lys-OPhNO2). L activité hydrolytique résiduelle est à l abri de l effet d un inhibiteur protéique (inhibiteur du soja).

On montre, par spectroscopie de différence, que lorsqu une molécule de plasmine est fixée sur l α2-macroglobuline, une molécule de trypsine peut encore se fixer, sans déplacer la plasmine.

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AbbreviationsZ-Arg-nitroanilideN-α-carbobenzoxy-l-arginine-p-nitroanilideZ-Lys-OPhNO2N-α-carbobenzoxy-l-lysine nitrophénylesterBz-Arg-OEtbenzoyl-arginine ethyl esterTos-Arg-OMetosyl-arginine methylesterNPGBnitrophényl p guanidobenzoateRecommended articlesCiting articles (0)View full textCopyright © 1976 Published by Elsevier B.V.Recommended articles

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